beyotime試劑盒用于定量或定性檢測血清、血漿、尿液、細胞培養(yǎng)上清等樣本中的抗原、抗體、激素、細胞因子等生物分子。其原理基于抗原-抗體特異性結合與酶促顯色反應，實現(xiàn)對目標物的精準檢測。然而，實驗結果易受操作細節(jié)、環(huán)境條件與試劑保存狀態(tài)影響。掌握beyotime試劑盒的科學使用方法，是確保輸出真實、可靠數(shù)據(jù)的關鍵。 一、使用前準備
試劑檢查與平衡：
檢查試劑盒是否在有效期內(nèi)，包裝是否完好；
將試劑（尤其是酶標抗體、顯色液、終止液）從2-8℃冰箱取出，室溫（18-25℃）平衡30-60分鐘，避免冷凝水影響反應；
輕柔混勻液體試劑，避免劇烈震蕩產(chǎn)生氣泡。
樣本處理：
血清/血漿樣本需離心去除雜質，避免溶血、脂血或細菌污染；
根據(jù)說明書要求進行稀釋，確保樣本濃度在檢測范圍內(nèi)。
儀器與耗材準備：
準備酶標儀（檢測波長依顯色系統(tǒng)而定，如TMB為450nm）、洗板機或手動洗瓶、移液器（定期校準）、一次性槍頭與酶標板（若未預包被）。
二、加樣與孵育
加樣操作：
使用多通道移液器，確保加樣量準確（通常50-100μL）；
避免交叉污染，更換槍頭，加樣針勿觸碰孔壁；
設立空白孔、標準品孔（梯度稀釋）、質控孔與待測樣本孔。
孵育條件：
嚴格按照說明書控制孵育時間與溫度（通常37℃水浴或恒溫箱）；
覆蓋封板膜，防止蒸發(fā)與污染；
孵育期間避免頻繁開閉溫箱。
三、洗滌步驟
充分洗滌：
每步反應后需洗滌3-5次，去除未結合物質，降低背景噪音；
使用洗板機時，確保洗液充滿孔底，避免“花板”；
手工洗滌時拍干，但避免孔內(nèi)干涸。
洗滌液配制：
使用蒸餾水或去離子水配制PBST（含吐溫-20的磷酸鹽緩沖液），現(xiàn)配現(xiàn)用。
四、顯色與終止
顯色反應：
加入顯色液（如TMB或OPD），避光孵育指定時間（通常10-30分鐘）；
觀察顏色變化，避免過度顯色導致信號飽和。
終止反應：
準確加入終止液（如2MH2SO2），立即終止酶促反應，穩(wěn)定顯色；
終止后輕輕震蕩混勻，確保顏色均勻。
五、讀數(shù)與數(shù)據(jù)分析
酶標儀檢測：
在規(guī)定時間內(nèi)（通常30分鐘內(nèi)）讀取吸光度（OD值）；
設置正確的波長（主波長450nm，參考波長630nm）。
標準曲線繪制：
以標準品濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，繪制標準曲線；
采用四參數(shù)擬合或線性回歸計算待測樣本濃度。
結果判讀：
檢查空白孔OD值是否達標（通常<0.1）；
質控品結果應在允許范圍內(nèi)，否則實驗無效。
